Разработка иммунофлюоресцентных диагностикумов для выявления антител классов G и M к Trepnema Pallidum

ЗАО

Электрогорск

Марданлы С. Г.
Шершнева Н. Н.

Реакция иммунофлюоресценции в модификации РИФабс является на сегодняшний день одним из самых чувствительных методов серодиагностики сифилиса и до сих пор не утратила свою значимость. РИФ-абс рекомендуется для ранней серодиагностики сифилиса, так как она становится положительной уже на третьей неделе после заражения, т.е. или за несколько дней до появления шанкра или одновременно с ним. Цель: разработка диагностикумов для выявления трепонемспецифических IgG и IgМ в реакции иммунофлюоресценции в модификации РИФабс в клиническом материале полученном от больных сифилисом. Материалы и методы. В работе использовали инактивированный антиген, который представляет собой бледную трепонему штамма Никольса. Патогенные трепонемы культивировали в кроликах породы шиншилла. В качестве коньюгата использовали антивидовые антитела, меченные флюорохромом. Для проверки чувствительности и специфичности разработанного диагностикума были проанализированы 144 пробы сыворотки крови больных сифилисом и 120 образцов, полученных от здоровых лиц, подтвержденные на наличие антител в иммуноферментном анализе (ИФА) и РПГА. Результаты. На базе предприятия «ЭКОлаб» разработаны иммунофлюоресцентные диагностикумы для выявления трепонемспецифических IgG и IgМ. Заражение кроликов проводили путем интратестикулярного введения взвеси бледных трепонем в дозе 1 мл в семенник. На 7-9 день у кроликов развивался орхит. После подсчета бледных трепонем в выделенной суспензии, методом микроскопирования препарата в темном поле, наносили антиген на предметные стекла и проводили фиксацию. Нами были подобраны оптимальные условия сенсибилизации антигена и постановки иммунофлюоресцентного анализа. Для исключения неспецифических результатов использовали связывание групповых антител сорбентом – экстрактом из культуральных бледных трепонем (штаммы V, VII, VIII, VIX и Рейтера), обработанных ультразвуком. Оптимальное разведение сывороток с ультрасорбентом составило 1:5. При исследовании 144 проб сыворотки крови больных сифилисом в РИФабс, ИФА и РПГА в 100% случаев в РИФабс, 99% в ИФА и 100% случаев в РПГА были обнаружены антитела классов G-, М-, G + М в 87%, 13% и 53% случаев соответственно. При исследовании всеми вышеуказанными методами 120 образцов, полученных от здоровых лиц, антител к Tr.pallidum выявлено не было. Для дополнительного подтверждения специфичности разработанных диагностикумов были исследованы 42 пробы сыворотки крови больных бореллиозом, и все они дали отрицательный результат в РИФабс. Апробация на клиническом материале показала 100% чувствительность и специфичность разработанного диагностикума. Заключение. На предприятии ЗАО «ЭКОлаб» (г. Электрогорск Московской обл.) разработаны и производятся иммунофлюоресцентные диагностикумы «Антипаллидум Флюороген IgG» и Антипаллидум Флюороген IgМ» для серодиагностики сифилиса.