Разработка нового набора реагентов для линейного иммуноблоттинга с целью диагностики сифилиса

ЗАО

Электрогорск

Марданлы С. Г.
Ротанов С. В.
Амелина Е. А.
Захаров М. В.
Толстых Н. С.
Арсеньева В. А.

В последние годы для диагностики сифилиса активно используют метод линейного иммуноблоттинга (ИБ), позволяющего в рамках одного исследования дифференцированно определять антитела к различным антигенам бледной трепонемы. Цель: разработка, изучение клинической эффективности и регистрация в Российской Федерации первого отечественного набора реагентов для иммуноблоттинга с целью диагностики сифилитической инфекции. Материалы и методы. За основу разработки был принят метод непрямого ИФА: в качестве иммуносорбента использованы нитроцеллюлозные мембраны, на которых в виде дискретных линий иммобилизовали рекомбинантные химерные полипептиды ТрN15, TpN17, TpN47 и TmpA, аналоги антигенов Treponema pallidum; а качестве конъюгата – козьи антитела против IgG человека, меченные щелочной фосфатазой; в качестве субстрата – окрашивающий буфер "BCJP/NBT Ready-to-use-Substrate". При оценке показателей клинической эффективности разработанного набора реагентов использовали 219 образцов сыворотки крови и 48 проб спинномозговой жидкости, полученных от больных сифилисом и здоровых лиц, аттестованные по содержанию в них трепонемоспецифических антител в реакциях иммунофлюоресценции и пассивной гемагглютинации. Результаты. В результате работы по получению оригинального иммуносорбента и определению оптимальных условий проведения исследования с ним был разработан новый отечественный набор реагентов "Лайн-Блот Сифилис" для определения трепонемоспецифических антител методом линейного ИБ, который предназначен для использования в качестве подтверждающего теста при дифференциальной диагностике сифилиса. Изучение свойств разработанного набора реагентов, проведенное с использованием аттестованных панелей контрольных материалов, сывороток крови и ликвора, показало 100% клиническую чувствительность, специфичность и воспроизводимость результатов исследований, что позволило представить "Лайн-Блот Сифилис" для государственной регистрации в Российской Федерации в установленном порядке. Приемочные технические и медицинские испытания набора реагентов "Лайн-Блот Сифилис" были осуществлены в ФГУ "ГНЦД Росмедтехнологий"; при этом также была показана его высокая клиническая эффективность: чувствительность – 96,4%, специфичность – 100% и воспроизводимость – 100%. Заключение. Приказом Росздравнадзора № 1540-Пр/10 от 01.02.2010 г. набор реагентов "Лайн-Блот Сифилис" производства ЗАО "ЭКОлаб" (г. Электрогорск Московской обл.) был разрешен к производству, продаже и применению на территории Российской Федерации; регистрационное удостоверение № ФСР 2010/06925 от 01.03.2010 г.