Возможности поляризационного флуоресцентного иммуноанализа в выявлении антител к Treponema Pallidum

Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России, ООО «МДЛ»

Москва

КОРОГОДИН Д. В.
АЛИМБАРОВА Л. М.
ЧИРКОВА Е. Ю.
ЕРЕМИН С. А.

Цель настоящей работы заключалась в оценке диагностических свойств экспери-ментальной тест-системы на основе метода поляризационного флуоресцентного иммуно-анализа (ПФИА) для выявления суммарных антител к Treponema pallidum в сыворотке крови у людей. Материалы и методы: в работе были использованы стандартные химические, иммунохимические, серологические методы исследования. В качестве антигенов были изучены рекомбинантные и синтетические аналоги трепонемных антигенов, в качестве меток - флуоресцеин и его производные. Поляризацию флуоресценции регистрировали на поляризационном флуориметре TDx фирмы «Abbott» (США) в режиме PHOTO-CHECK. Эффективность ПФИА изучали на двух панелях сывороток крови 196 больных с различными, подтвержденными формами сифилиса, и 100 лиц, не страдающих сифилисом (70 здоровых доноров и 30 больных другими кожными заболеваниями), полученных соответственно из КВД №1 и СПК №1 (Москва). В качестве референс тест-систем для определения антител к Tr.pallidum использовали ИФА тест-систему “Treponema pallidum NovaLisa” (NovaTek, Германия), тест для иммуноблоттинга «RecomBlot Treponema” (Microgen, Германия). Результаты: с целью поиска соединений, наиболее полно отражающих иммуногенные свойства трепонемных антигенов, нами исследованы рекомбинантные антигены - аналоги антигенов Tr.pallidum и синтетические пептиды, соответствующие аминокислотным последовательностям иммунодоминантных участков естественных антигенов Tr.pallidum. Кандидаты в иммуногены были протестированы первоначально на панели сывороток в ИФА, затем антигены, показавшие высокую иммуногенность, были использованы для приготовления флуоресцеин-меченных трейсеров и протестированы на панели сывороток в ПФИА. Наиболее высокие показатели чувствительности были получены при использовании антигенов р17, пептидов P4 (VMYASSG -Tp15) и Р7 (KGGIFR - Tp17), относящихся к аналогам естественного липопротеина Tr.pallidum с молекулярной массой 15 и 17 кД. Проведен анализ диагностических показателей и выделена оптимальная комбинация трепонемных антигенов-трейсеров с производными флуоресцеином для создания тест-системы, а также оценка ее диагностических свойств. Чувствительность разработанной тест-системы у больных первичным сифилисом относительно ком-мерческого иммуноферментного набора составила 100%, у больных вторичным сифи-лисом - 98,7%, специфичность - 100%. Совпадение результатов обоих методов выявления антител к Tr.pallidum установлено у 96% обследованных пациентов. У больных первич-ным сифилисом чувствительность иммуноблоттинга и метода ПФИА достигала 97,8±2,3%, у больных вторичным сифилисом - 100%. При скрытом раннем сифилисе чувствительность метода ПФИА составила 96%, что сопоставимо с чувствительностью стандартных не трепонемных и трепонемных тестов, специфичность - 98%. Выводы: показано, что метод ПФИА прост в применении, не трудоемок и может быть реко-мендован к использованию в качестве дополнительного к регламентированным методам диагностики сифилиса.