Новые технологии в диагностике инфекционных заболеваний и возможности их применения в дерматомикологии

НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина ГБОУ ВПО СЗГМУ им. И.И. Мечникова Минздравсоцразвития России

Санкт-Петербург

Васильева Н В
Богомолова Т С
Полищук А Г

В последние годы отмечается значительный прогресс в диагностике инфекционных заболеваний. Достижения науки и техники в области молекулярной биологии и физики привели к созданию принципиально новых методов обнаружения и идентификации микроорганизмов в биологических субстратах организма человека. Разработаны новые технологии, основанные на принципах масс-спектрометрии (MALDI-TOF), а также сочетающие полимеразную цепную реакцию и электро-спрей-ионизационную масс-спектрометрию (ESI-TOF). Прибор MALDI-TOF, анализирующий масс-спектры белков, позволяет быстро, в течение нескольких минут, идентифицировать до вида чистые культуры бактерий и грибов. База белковых масс-спектров, являющаяся компонентом MALDI-TOF оборудования, в настоящее время включает более 1800 видов микроорганизмов, в том числе вызывающих заболевания кожи: Candida spp., Malassezia spp., Trichophyton spp. и др. Известно, что идентификация дерматомицетов традиционными морфологическими методами, как правило, требует длительного времени, так как культуры и их органы спороношения развиваются медленно, иногда до 1 месяца и более. Применение методов идентификации с помощью масс-спектрометрии могло бы существенно ускорить процесс видовой идентификации возбудителей дерматомикозов, в том числе, онихомикоза. Первая опубликованная работа по использованию в этих целях MALDI-TOF метода показала 100% совпадение его результатов с результатами ДНК секвенирования и морфологического анализа (Erhard M. et al.,Exp. Dermatol.-2008.-Vol.17.-P.356-361). Технология ПЦР/ESI-TOF предназначена для прямого обнаружения микроорганизмов в биологических жидкостях и тканях человека. Эта технология, сочетающая ПЦР и масс-спектрометрию (PLEX-ID), позволяет определить патогенные микроорганизмы в одном клиническом образце (без получения культуры) в течение 6-8 часов. База данных PLEX-ID уже сегодня насчитывает около 3500 видов и штаммов микроскопических грибов, и сегодня возможно идентифицировать почти весь спектр патогенных грибов в кожных чешуйках, волосах и соскобах. Однако, применение этой методологии в рутинной практике для этих целей в настоящее время экономически нецелесообразно. На данный момент с помощью ПЦР тест-систем можно быстро идентифицировать в клиническом материале от больных только два дерматомицета – Trichophyton rubrum и Trichophyton interdigitale. Зарубежная коммерческая ПЦР-система позволяет выявить Trichophyton rubrum (Dermatophyte PCR kit, Diagnostica, Дания), а российская коммерческая ПЦР-система - T. rubrum и T. interdigitale (ТрифАм-тест, компания ГЕНТЕХ, Москва) в клиническом материале от больных с онихомикозом, причем прогностическая ценность отрицательного результата составляет 70%. Кроме того, ПЦР тест-системы не позволяют определить в клиническом материале недерматомицеты (дрожжи и плесневые грибы), а технологии масс-спектрометрии (MALDI-TOF, PLEX-ID) и ПЦР тест-системы по-прежнему не позволяют определить этиологическую роль недерматомицетов в процессе заболевания.