Нарушения тканевого гомеостаза в тканях при острой форме гнёздной алопеции

-

Москва

Гаджигороева А.Г.
Коган Е.А.
Терещенко Г.П.

Гнёздная алопеция (ГА) – органоспецифическое аутоиммунное заболевание с поражением волосяных фолликулов, формирующееся в условиях потери фолликулами иммунной толерантности. При нарушении местных иммунных механизмов регуляции воспаление ведёт к прекращению роста волос и их выпадению.

Цель исследования: Изучить нарушения тканевого гомеостаза в тканях пациентов с острой формой ГА.

Материал и методы. Изучены образцы биоптатов пациентов с ГА. 20 образцов получены из «зоны расшатанных волос» в острую фазу заболевания у пациентов с локальной алопецией. Для контроля исследования использованы биоптаты кожи 6 здоровых людей, взятые во время косметологических операций.

В качестве первичных антител использовались моноклональные антитела к CD4+, CD8+CD68+; антитела к CD95, FasL (LabVision), Ki67+, bcl2, CK15+ (DAKO), VEGF (Epitomics). Апоптоз в биоптатах определяли с использованием in situ labeling TUNEL System (Promega) с расчетом процента апоптозных телец на 300 клеток. Ставили положительные и отрицательные контрольные реакции. Результаты оценивались количественным методом (в % окрашенных клеток или их ядер на 300 клеток).

Статистический анализ данных проводился непараметрическим сравнением Уайта для малых выборок и непараметрическим методом с применением U-теста Манна–Уитни.

Результаты исследования. Клинические проявления острой фазы воспаления при ГА характеризуются лёгкой гиперемией кожи, отсутствием волос в очаге, выявлением по краю очагов облысения пеньков обломанных волос, «чёрных точек» кадаверизованных волос; дерматоскопия выявляет жёлто-коричневые точки в устьях пустых фолликулов или вокруг сохранившихся волос в очаге заболевания. ИГХ-исследование показывает, что перифолликулярные и периваскулярные инфильтраты состоят из субпопуляций Т-лимфоцитов CD8+,CD4+, умеренного количества макрофагов CD68+ в соотношении 67%, 10% и 23% клеток соответственно, в то время как в здоровых контролях CD4+ отсутствует, CD8+клетки составляют 33%; CD68+ 67%. В острую фазу ГА TUNEL-тест обнаруживает апоптозные тельца среди эпителиальных клеток наружного эпителиального влагалища корня (НЭВК): до 33‰ в зоне утолщения bulge и в нижней части ВФ ( в контроле 0,1‰ клеток НЭВК). В тех же зонах в эпителиальных кератиноцитах выявляется 90% клеток с Fas/Apo-рецепторами CD95+. В воспалительном инфильтрате, преимущественно в СД8+ Т-клетках и CD68+макрофагах выявляется 30% клеток с FasL. В эпителиоцитах ВФ отсутствуют bcl-2+ клетки, Ki67+ снижены до 5%. В компартментах ВФ отсутствуют СК15+ клетки. Умеренное количество VEGF обнаруживается в эпителии, эндотелии сосудов и в CD68+макрофагах - до 12% клеток каждого типа. В здоровых контролях Fas/Apo-рецептор выражен в 5% эпителиальных кератиноцитов, FasL отсутствует. В эпителиоцитах ВФ выявляется 28% bcl-2+ клеток; Ki67+ в 15% клеток. СК15+ в 25%. VEGF отсутствует.

Выводы. В острую фазу заболевания основную массу клеток воспалительного перифолликулярного и периваскулярного инфильтрата составляют супрессорные CD8+ Т-лимфоциты, и, в меньшей степени, CD4+ хелперы и макрофаги CD68+. Кооперируясь, они формируют опосредованный Т-клетками цитотоксический иммунный ответ и обеспечивают иммунный цитолиз клеток. В результате развившегося воспаления прекращается дифференцировка клеток ВФ (отсутствие клеток CK15+), резко снижается пролиферативная активность (отсутствует bcl2+ и низкий уровень Ki67+) и наблюдается чрезмерный ангиогенез. Нарушение тканевого гомеостаза ведёт к дисморфогенезу ВФ, который происходит посредством апоптоза отдельных частей его компартментов.